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酶聯(lián)免疫試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線如何繪制?看這里!
更新時間:2023-03-02   點擊次數(shù):1176次
  在動物檢疫方面,酶聯(lián)免疫試劑盒在豬傳染性胃腸炎、牛副結(jié)核病、牛傳染性鼻氣管炎、豬偽狂犬病、藍舌病等的診斷中已為廣泛采用的標(biāo)準(zhǔn)方法。
  
  用于標(biāo)記的酶用于標(biāo)記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室溫下穩(wěn)定;反應(yīng)產(chǎn)物易于顯現(xiàn);能商品化生產(chǎn)。目前應(yīng)用較多的有辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP應(yīng)用廣。
  
  許多試劑檢測都涉及到標(biāo)準(zhǔn)曲線的問題,標(biāo)準(zhǔn)曲線做的好與壞會直接影響到實驗的結(jié)果,甚至是關(guān)系到實驗的成敗,那么究竟如何繪制或制作標(biāo)準(zhǔn)曲線呢?
  
  小編就具體為您講解下酶聯(lián)免疫試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制要點:
  
  標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意:
  
  1、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出來的,所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,否則后面的實驗結(jié)果無從談起。
  
  2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi),包括上限和下限。而對于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線,盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
  
  3、采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度,這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。
  
  4、檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品時,應(yīng)按濃度遞增順序進行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準(zhǔn)確性。
  
  5、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個點,但至少要保證有5個點。
  
  6、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎?,但一般來說,相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98,對于有些實驗,至少要0.99甚至是0.999。
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